El tamaño de muestra de la prueba de esterilidad USP <71> es uno de los puntos más revisados en auditorías e inspecciones regulatorias: cuántas unidades tomar de cada lote y cuánto producto transferir a cada medio de cultivo no son decisiones del laboratorio, sino requisitos compendiales definidos por dos tablas del capítulo. Un plan de muestreo por debajo del mínimo hace que la prueba no sea conforme, con consecuencias directas sobre la liberación del lote. En esta guía vemos cómo aplicar correctamente las reglas de la USP <71>, cómo se alinean con la Ph. Eur. 2.6.1 y qué errores evitar para estar preparados para una auditoría.
Tamaño de muestra USP <71>: qué exige el capítulo
El capítulo USP <71> Sterility Tests es un texto armonizado entre las tres farmacopeas del Pharmacopeial Discussion Group (USP, Ph. Eur. y JP). La prueba utiliza dos medios de cultivo: el medio fluido de tioglicolato (FTM), incubado a 30–35 °C y destinado principalmente a bacterias anaerobias además de aerobias, y el medio de digerido de caseína y soja (SCDM/TSB), incubado a 20–25 °C para hongos y bacterias aerobias. La incubación dura no menos de 14 días, con observación periódica de los cultivos.
El tamaño de muestra está regido por dos tablas distintas, que responden a dos preguntas diferentes:
- Tabla 2 — cuánto producto tomar de cada envase para cada medio, según el volumen o peso de llenado;
- Tabla 3 — cuántas unidades analizar por lote, según el tamaño del lote y el tipo de producto.
Las reglas se aplican tanto a la filtración por membrana — preferible siempre que la naturaleza del producto lo permita — como a la inoculación directa.
Cuántas unidades analizar por lote: la Tabla 3
La Tabla 3 establece el número mínimo de artículos a analizar en relación con el número de artículos del lote. Los umbrales principales para las categorías más comunes se resumen a continuación.
| Tipo de producto | Tamaño del lote | Número mínimo de unidades a analizar |
|---|---|---|
| Preparaciones parenterales | ≤ 100 envases | 10% o 4 envases, lo que sea mayor |
| 101–500 envases | 10 envases | |
| > 500 envases | 2% o 20 envases, lo que sea menor | |
| Parenterales de gran volumen | — | 2% o 10 envases, lo que sea menor |
| Oftálmicos y otros no inyectables | ≤ 200 envases | 5% o 2 envases, lo que sea mayor |
| > 200 envases | 10 envases | |
| Productos sólidos a granel | ≤ 4 envases | Cada envase |
| 5–50 envases | 20% o 4 envases, lo que sea mayor | |
| > 50 envases | 2% o 10 envases, lo que sea mayor |
Un punto que suele malinterpretarse: si el contenido de cada unidad es suficiente para ambos medios (según la Tabla 2), puede dividirse en porciones iguales que se añaden a cada medio. Si el contenido no alcanza para ambos, hay que utilizar el doble de las unidades indicadas en la tabla.
Temas como este — requisitos compendiales traducidos a práctica operativa — son el pan de cada día de The Pragmatic GMP, el boletín semanal gratuito de GuideGxP: un análisis GMP concreto y sin rodeos cada semana en tu bandeja de entrada. Suscríbete aquí.
Cuánto producto por cada medio: la Tabla 2
La Tabla 2 define la cantidad mínima a utilizar para cada medio, por cada envase muestreado. Para líquidos:
- volumen < 1 mL: todo el contenido del envase;
- 1–40 mL: la mitad del contenido, pero no menos de 1 mL;
- > 40 mL y ≤ 100 mL: 20 mL;
- > 100 mL: el 10% del contenido, pero no menos de 20 mL;
- líquidos antibióticos: 1 mL.
Para sólidos:
- < 50 mg: todo el contenido del envase;
- de 50 mg a menos de 300 mg: la mitad del contenido, pero no menos de 50 mg;
- de 300 mg a 5 g: 150 mg;
- > 5 g: 500 mg.
Para preparaciones insolubles, cremas y ungüentos la cantidad de referencia es de al menos 200 mg, mientras que para productos sanitarios se utiliza el dispositivo completo, cortado en piezas o desmontado.
USP <71> y Ph. Eur. 2.6.1: armonización e intercambiabilidad
Las tablas de la USP <71> coinciden con las del capítulo 2.6.1 de la Farmacopea Europea y con el capítulo correspondiente de la Farmacopea Japonesa: el texto fue armonizado por el Pharmacopeial Discussion Group. La guía ICH Q4B Annex 8, adoptada por las autoridades de las regiones ICH (a través de la EMA para la UE y de la FDA para EE. UU.), reconoce la intercambiabilidad de los tres capítulos a efectos regulatorios, con algunas precisiones locales indicadas en el propio anexo.
Dos advertencias prácticas. Primera: la intercambiabilidad no exime de declarar en el dossier qué farmacopea se aplica ni de gestionar las divergencias residuales señaladas por las autoridades. Segunda: para productos estériles fabricados asépticamente, el Anexo 1 de las GMP de la UE exige que las muestras para la prueba de esterilidad sean representativas de todo el lote e incluyan en particular las unidades de mayor riesgo: las llenadas al principio y al final del llenado aséptico y tras intervenciones significativas en la línea. El mínimo compendial de la Tabla 3 debe combinarse, por tanto, con un criterio de selección de unidades basado en riesgo.
Errores típicos detectados en auditoría
- Muestrear por debajo del mínimo en productos costosos: el valor económico de las unidades (biológicos, ATMP, lotes pequeños) no justifica desviaciones de la Tabla 3; las reducciones solo aplican donde el propio capítulo las contempla (p. ej., lotes muy pequeños de sólidos a granel).
- Confundir las dos tablas: la Tabla 3 cuenta envases por lote, la Tabla 2 cantidades por envase y por medio; el plan de muestreo debe documentar ambas.
- Olvidar duplicar las unidades cuando el contenido de un envase no es suficiente para ambos medios.
- Selección no representativa: unidades tomadas todas del mismo punto del llenado, sin cubrir inicio, final e intervenciones, en contra del Anexo 1.
- PNT desalineados entre la planta y el laboratorio externo: el laboratorio contratado aplica una farmacopea y el dossier declara otra.
Recomendación GuideGxP
La forma más sólida de hacer defendible el tamaño de muestra es eliminar todo cálculo improvisado el día del muestreo: reproduce las Tablas 2 y 3 en el PNT de la prueba de esterilidad, prepara una matriz con los formatos y tamaños de lote habituales de tu planta (con el número de unidades ya calculado y verificado por QA) e integra en el plan de muestreo el criterio de representatividad del Anexo 1, con el mapa de los puntos de toma. En auditoría, la coherencia entre PNT, batch record y dossier regulatorio es lo primero que verifica el inspector.
Si trabajas en varios mercados y necesitas gestionar las divergencias entre farmacopeas más allá de la prueba de esterilidad, la guía operativa Farmacopeas Comparadas en GMP: gestión operativa de las divergencias USP – Ph. Eur. – JP – BP en auditorías GxP ofrece criterios de decisión y herramientas listas para usar para defender tus elecciones compendiales en inspección.
