Grados A, B, C y D del Anexo 1: cuatro letras que deciden dónde puedes llenar un vial estéril, cómo te vistes para entrar en el área y cuántos muestreos ambientales realizarás cada año. La revisión de 2022 del Anexo 1 de las GMP de la UE (normas de correcta fabricación, NCF), operativa desde el 25 de agosto de 2023, actualizó los límites de partículas de los cuatro grados, llevó a “sin crecimiento” los niveles de acción microbiológicos del Grado A y aclaró la relación con las clases ISO 14644-1. En esta guía encontrarás las tablas actualizadas, las equivalencias ISO, la diferencia entre clasificación y monitoreo y los errores que los inspectores cuestionan con más frecuencia.
Grados A, B, C y D del Anexo 1: qué definen
Los grados son los niveles de limpieza que el Anexo 1 asigna a los entornos de contaminación controlada en función del riesgo de las operaciones que se realizan en ellos:
- Grado A: la zona crítica para operaciones de alto riesgo, como el llenado aséptico, las conexiones asépticas y el cierre de envases. Se mantiene con flujo de aire unidireccional y, en configuraciones convencionales, tiene un entorno de Grado B; con aisladores, la estrategia de control de contaminación (CCS) puede justificar un entorno de grado inferior.
- Grado B: el entorno que rodea la zona de Grado A para la preparación y el llenado asépticos.
- Grados C y D: áreas para fases menos críticas de la fabricación estéril, como la preparación de soluciones a filtrar (C) o el lavado de componentes y equipos (D).
El punto de método que introduce la revisión de 2022 es que los grados no son etiquetas en un plano: son el resultado de la CCS del sitio, que debe justificar dónde se realiza cada operación, con qué protecciones y con qué monitoreo.
Límites de partículas: la tabla de clasificación
La clasificación se realiza según ISO 14644-1, midiendo las partículas ≥0,5 µm y ≥5 µm tanto en reposo como en operación (incluida la operación simulada). Estos son los límites máximos de concentración total de partículas por m³ de la Tabla 1 del Anexo 1 de 2022:
| Grado | ≥0,5 µm – en reposo | ≥0,5 µm – en operación | ≥5 µm – en reposo | ≥5 µm – en operación |
|---|---|---|---|---|
| A | 3.520 | 3.520 | No especificado | No especificado |
| B | 3.520 | 352.000 | No especificado | 2.930 |
| C | 352.000 | 3.520.000 | 2.930 | 29.300 |
| D | 3.520.000 | No predeterminado | 29.300 | No predeterminado |
Dos notas prácticas: para los Grados A y B, la clasificación a ≥5 µm ya no es obligatoria, pero puede considerarse si la CCS o las tendencias históricas lo indican; para el Grado D en operación, los límites no están predeterminados y debe definirlos el fabricante con base en una evaluación de riesgos documentada.
Equivalencias con las clases ISO 14644-1
En los conteos a ≥0,5 µm, las correspondencias prácticas son: Grado A equivalente a ISO 5 (en reposo y en operación), Grado B ISO 5 en reposo e ISO 7 en operación, Grado C ISO 7 en reposo e ISO 8 en operación, Grado D ISO 8 en reposo. Atención: la equivalencia solo aplica a la clasificación de partículas. Un certificado ISO 5 no “asciende” una sala a Grado A, porque el grado GMP implica además límites microbiológicos, monitoreo continuo, requisitos de vestimenta y dinámicas de flujo de aire que la ISO 14644-1 no cubre. Confundir ambos sistemas es el origen de muchos hallazgos en auditoría.
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Límites microbiológicos: los niveles de acción de la Tabla 6
Junto a la clasificación física, el Anexo 1 establece niveles de acción para la contaminación microbiana durante la calificación:
- Grado A: sin crecimiento – para todos los métodos (muestra de aire, placas de sedimentación, placas de contacto, huella de guante). Cualquier recuperación exige una investigación.
- Grado B: 10 UFC/m³ en la muestra de aire; 5 UFC/4 horas en placa de sedimentación (90 mm); 5 UFC por placa de contacto (55 mm); 5 UFC por guante (5 dedos).
- Grado C: 100 UFC/m³; 50 UFC/4 horas; 25 UFC por placa de contacto.
- Grado D: 200 UFC/m³; 100 UFC/4 horas; 50 UFC por placa de contacto.
El paso del Grado A de “<1 UFC” a “sin crecimiento” es uno de los cambios más citados en las inspecciones posteriores a 2023: los PNT/PNO de monitoreo ambiental que todavía citan el límite antiguo son un hallazgo fácil.
Clasificación y monitoreo: dos ejercicios distintos
La clasificación (y la recalificación periódica) demuestra que la sala es capaz de cumplir su grado; el monitoreo ambiental de rutina demuestra que lo cumple realmente durante la producción. El Anexo 1 dedica tablas distintas a los dos ejercicios: en el monitoreo en operación del Grado A y en reposo del Grado B aparece, por ejemplo, un límite de 29 partículas/m³ a ≥5 µm, pensado como señal temprana de anomalía más que como criterio de clasificación. En el Grado A, el monitoreo de partículas debe cubrir además toda la duración de las operaciones críticas. Confundir las dos tablas – o usar la equivocada en las especificaciones del sistema de monitoreo – es un error recurrente.
Requisitos operativos por grado: flujo de aire, presiones y recalificación
Más allá de los conteos, cada grado conlleva requisitos dinámicos. En la zona de Grado A, el flujo unidireccional debe mantener una velocidad de aire homogénea en el rango guía de 0,36–0,54 m/s en la posición de trabajo, verificada con estudios de visualización de flujo. Entre salas adyacentes de distinto grado debe mantenerse una diferencia de presión mínima de 10 Pa (valor guía). La recalificación periódica tiene una frecuencia máxima definida: cada 6 meses para los Grados A y B, cada 12 meses para los Grados C y D, además de tras cambios relevantes en salas o sistemas. Por último, cada grado impone su propio estándar de vestimenta, hasta la indumentaria estéril completa con capucha, gafas y guantes estériles para operar en Grado A/B.
Errores típicos detectados en auditoría
- Declarar una sala “Grado A” solo con el certificado ISO 5, sin límites microbiológicos, monitoreo continuo ni estudios de flujo.
- PNT y especificaciones que aún citan los límites del Anexo 1 de 2008 (por ejemplo “<1 UFC” en Grado A o 20 partículas ≥5 µm).
- Recalificación tratada como la clasificación inicial, sin respetar los intervalos máximos de 6/12 meses.
- Límites “en operación” del Grado D ausentes o copiados de otros sitios sin evaluación de riesgos local.
- Sin vínculo documentado entre los grados asignados y la CCS: el mapa de grados existe, pero no está justificado.
Recomendación GuideGxP
Trata el mapa de grados como un documento vivo de la CCS: para cada sala, registra el grado, la equivalencia ISO usada para la clasificación, los límites aplicables (clasificación, monitoreo, microbiología), la fecha de la última recalificación y el próximo vencimiento. Un registro así estructurado responde en minutos a la pregunta más frecuente de los inspectores: “¿por qué esta operación se realiza en este grado?”.
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Fuentes oficiales
- EudraLex Volumen 4 – Anexo 1: Fabricación de medicamentos estériles (revisión 2022, Comisión Europea)
- EudraLex Volumen 4 – Directrices de la UE sobre normas de correcta fabricación (Comisión Europea)
- ISO 14644-1:2015 – Salas limpias y locales anexos controlados – Parte 1: Clasificación de la limpieza del aire por concentración de partículas
- PIC/S – Guide to GMP PE 009, Anexo 1 (versión armonizada PIC/S)
