Annex 1 Grade A, B, C e D: quattro lettere che decidono dove puoi riempire una fiala sterile, come ti vesti per entrare in reparto e quanti campionamenti ambientali eseguirai ogni anno. La revisione 2022 dell'Annex 1 EU GMP, operativa dal 25 agosto 2023, ha aggiornato i limiti particellari dei quattro grade, ha portato a “no growth” i livelli d'azione microbiologici del Grade A e ha chiarito il rapporto con le classi ISO 14644-1. In questa guida trovi le tabelle aggiornate, le equivalenze ISO, la differenza tra classificazione e monitoraggio e gli errori che gli ispettori contestano più spesso.
Grade A, B, C e D dell'Annex 1: cosa definiscono
I grade sono i livelli di pulizia che l'Annex 1 assegna agli ambienti a contaminazione controllata in funzione del rischio delle operazioni che vi si svolgono:
- Grade A: la zona critica per le operazioni ad alto rischio, come riempimento asettico, connessioni asettiche e chiusura dei contenitori. È mantenuta da un flusso d'aria unidirezionale e, nelle configurazioni tradizionali, ha come background un Grade B; con isolatori, la Contamination Control Strategy (CCS) può giustificare background di grade inferiore.
- Grade B: l'ambiente di supporto che circonda la zona Grade A per preparazione e riempimento asettici.
- Grade C e D: aree per fasi meno critiche della produzione sterile, come la preparazione delle soluzioni da filtrare (C) o il lavaggio di componenti e attrezzature (D).
Il punto di metodo introdotto dalla revisione 2022 è che i grade non sono etichette da planimetria: sono il risultato della CCS del sito, che deve giustificare dove ogni operazione viene eseguita, con quali protezioni e con quale monitoraggio.
Limiti particellari: la tabella di classificazione
La classificazione si esegue secondo ISO 14644-1, misurando le particelle ≥0,5 µm e ≥5 µm sia at rest (a riposo) sia in operation (in attività, anche simulata). Questi sono i limiti massimi di concentrazione totale per m³ della Tabella 1 dell'Annex 1 2022:
| Grade | ≥0,5 µm – a riposo | ≥0,5 µm – operativo | ≥5 µm – a riposo | ≥5 µm – operativo |
|---|---|---|---|---|
| A | 3.520 | 3.520 | Non specificato | Non specificato |
| B | 3.520 | 352.000 | Non specificato | 2.930 |
| C | 352.000 | 3.520.000 | 2.930 | 29.300 |
| D | 3.520.000 | Non predeterminato | 29.300 | Non predeterminato |
Due note operative: per i Grade A e B la classificazione a ≥5 µm non è più richiesta, ma può essere considerata se la CCS o i trend storici lo indicano; per il Grade D in attività i limiti non sono predeterminati e vanno definiti dal fabbricante sulla base di una valutazione del rischio documentata.
Equivalenze con le classi ISO 14644-1
Sui conteggi a ≥0,5 µm, le corrispondenze pratiche sono: Grade A equivalente a ISO 5 (a riposo e operativo), Grade B ISO 5 a riposo e ISO 7 in attività, Grade C ISO 7 a riposo e ISO 8 in attività, Grade D ISO 8 a riposo. Attenzione però: l'equivalenza vale solo per la classificazione particellare. Un certificato ISO 5 non “promuove” un locale a Grade A, perché il grade GMP comporta anche limiti microbiologici, monitoraggio in continuo, requisiti di vestizione e dinamiche di flusso d'aria che la ISO 14644-1 non copre. È proprio la confusione tra i due sistemi l'origine di molti gap in audit.
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Limiti microbiologici: i livelli d'azione della Tabella 6
Alla classificazione fisica l'Annex 1 affianca i livelli d'azione per la contaminazione microbica durante la qualifica:
- Grade A: no growth – nessuna crescita, per tutti i metodi (campione d'aria, piastre di sedimentazione, piastre a contatto, impronta del guanto). Qualsiasi recupero richiede un'indagine.
- Grade B: 10 CFU/m³ nel campione d'aria; 5 CFU/4 ore su piastra di sedimentazione (90 mm); 5 CFU per piastra a contatto (55 mm); 5 CFU per guanto (5 dita).
- Grade C: 100 CFU/m³; 50 CFU/4 ore; 25 CFU per piastra a contatto.
- Grade D: 200 CFU/m³; 100 CFU/4 ore; 50 CFU per piastra a contatto.
Il passaggio del Grade A da “<1 CFU” a “no growth” è una delle modifiche più citate nelle ispezioni post-2023: le SOP di monitoraggio ambientale che riportano ancora il vecchio limite sono un finding facile.
Classificazione e monitoraggio: due esercizi diversi
La classificazione (e la riqualifica periodica) dimostra che il locale è capace di rispettare il suo grade; il monitoraggio ambientale di routine dimostra che lo rispetta davvero durante la produzione. L'Annex 1 dedica ai due esercizi tabelle distinte: nel monitoraggio in operation del Grade A e del Grade B a riposo compare ad esempio un limite di 29 particelle/m³ a ≥5 µm, pensato come segnale precoce di anomalia più che come criterio di classificazione. Nel Grade A il monitoraggio particellare deve inoltre coprire l'intera durata delle lavorazioni critiche. Confondere le due tabelle – o usare quella sbagliata nelle specifiche del sistema di monitoraggio – è un errore ricorrente.
Requisiti operativi per grade: flusso d'aria, pressioni e riqualifica
Oltre ai conteggi, ogni grade porta con sé requisiti dinamici. Nella zona Grade A il flusso unidirezionale deve mantenere una velocità dell'aria omogenea nell'intervallo guida di 0,36–0,54 m/s alla posizione di lavoro, verificata con studi di visualizzazione del flusso. Tra locali adiacenti di grade diverso va mantenuta una differenza di pressione minima di 10 Pa (valore guida). La riqualifica periodica ha una frequenza massima definita: ogni 6 mesi per i Grade A e B, ogni 12 mesi per i Grade C e D, oltre che dopo modifiche rilevanti a locali o impianti. Infine, ogni grade impone il proprio standard di vestizione, fino all'abbigliamento sterile completo con copricapo, occhiali e guanti sterili per operare in Grade A/B.
Errori tipici rilevati in audit
- Dichiarare “Grade A” un locale sulla base del solo certificato ISO 5, senza limiti microbiologici, monitoraggio continuo e studi di flusso.
- SOP e specifiche che citano ancora i limiti dell'Annex 1 2008 (ad esempio “<1 CFU” in Grade A o 20 particelle ≥5 µm).
- Riqualifica trattata come la classificazione iniziale, senza rispettare gli intervalli massimi di 6/12 mesi.
- Limiti “in operation” del Grade D assenti o copiati da altri siti senza valutazione del rischio locale.
- Nessun legame documentato tra grade assegnati e CCS: la mappa dei grade esiste, ma non è giustificata.
Raccomandazione GuideGxP
Trattate la mappa dei grade come un documento vivo della CCS: per ogni locale, registrate il grade, l'equivalenza ISO usata per la classificazione, i limiti applicabili (classificazione, monitoraggio, microbiologia), la data dell'ultima riqualifica e la prossima scadenza. Un semplice registro così strutturato risponde in pochi minuti alla domanda più frequente degli ispettori: “perché questa operazione avviene in questo grade?”.
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Fonti ufficiali
- EudraLex Volume 4 – Annex 1: Manufacture of Sterile Medicinal Products (revisione 2022, Commissione Europea)
- EudraLex Volume 4 – EU Guidelines for Good Manufacturing Practice (Commissione Europea)
- ISO 14644-1:2015 – Cleanrooms and associated controlled environments – Part 1: Classification of air cleanliness by particle concentration
- PIC/S – Guide to GMP PE 009, Annex 1 (versione armonizzata PIC/S)
