Die Stichprobengröße im Sterilitätstest nach USP <71> gehört zu den am häufigsten geprüften Punkten in Audits und behördlichen Inspektionen: Wie viele Einheiten aus jeder Charge zu entnehmen sind und wie viel Produkt in jedes Nährmedium überführt werden muss, sind keine Entscheidungen des Labors, sondern Arzneibuchanforderungen, die in zwei Tabellen des Kapitels festgelegt sind. Ein Probenahmeplan unterhalb des Minimums macht den Test nicht konform – mit direkten Folgen für die Chargenfreigabe. In diesem Leitfaden zeigen wir, wie die Regeln der USP <71> korrekt anzuwenden sind, wie sie mit der Ph. Eur. 2.6.1 zusammenhängen und welche Fehler Sie vermeiden sollten, um audit-ready zu bleiben.
Stichprobengröße nach USP <71>: Was das Kapitel verlangt
Das Kapitel USP <71> Sterility Tests ist ein zwischen den drei Pharmakopöen der Pharmacopeial Discussion Group (USP, Ph. Eur. und JP) harmonisierter Text. Der Test verwendet zwei Nährmedien: Fluid Thioglycollate Medium (FTM), inkubiert bei 30–35 °C und vor allem für anaerobe sowie aerobe Bakterien bestimmt, und Soybean–Casein Digest Medium (SCDM/TSB), inkubiert bei 20–25 °C für Pilze und aerobe Bakterien. Die Inkubation dauert mindestens 14 Tage, mit regelmäßiger Beobachtung der Kulturen.
Die Stichprobengröße wird durch zwei verschiedene Tabellen geregelt, die zwei unterschiedliche Fragen beantworten:
- Tabelle 2 — wie viel Produkt aus jedem Behältnis für jedes Medium zu entnehmen ist, abhängig von Füllvolumen oder Füllgewicht;
- Tabelle 3 — wie viele Einheiten pro Charge zu testen sind, abhängig von Chargengröße und Produktart.
Die Regeln gelten sowohl für die Membranfiltration — zu bevorzugen, wann immer die Beschaffenheit des Produkts es erlaubt — als auch für die Direktbeimpfung.
Wie viele Einheiten pro Charge: Tabelle 3
Tabelle 3 legt die Mindestanzahl der zu prüfenden Einheiten im Verhältnis zur Anzahl der Einheiten in der Charge fest. Die wichtigsten Schwellenwerte für die gängigsten Kategorien sind unten zusammengefasst.
| Produktart | Chargengröße | Mindestanzahl zu prüfender Einheiten |
|---|---|---|
| Parenterale Zubereitungen | ≤ 100 Behältnisse | 10 % oder 4 Behältnisse, je nachdem, was größer ist |
| 101–500 Behältnisse | 10 Behältnisse | |
| > 500 Behältnisse | 2 % oder 20 Behältnisse, je nachdem, was kleiner ist | |
| Großvolumige Parenteralia | — | 2 % oder 10 Behältnisse, je nachdem, was kleiner ist |
| Ophthalmika und andere nicht injizierbare Zubereitungen | ≤ 200 Behältnisse | 5 % oder 2 Behältnisse, je nachdem, was größer ist |
| > 200 Behältnisse | 10 Behältnisse | |
| Bulk-Feststoffe | ≤ 4 Behältnisse | Jedes Behältnis |
| 5–50 Behältnisse | 20 % oder 4 Behältnisse, je nachdem, was größer ist | |
| > 50 Behältnisse | 2 % oder 10 Behältnisse, je nachdem, was größer ist |
Ein häufig missverstandener Punkt: Reicht der Inhalt jeder Einheit für beide Medien aus (gemäß Tabelle 2), darf er in gleiche Portionen geteilt und jedem Medium zugesetzt werden. Reicht der Inhalt nicht für beide, muss die doppelte Anzahl der in der Tabelle angegebenen Einheiten verwendet werden.
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Wie viel Produkt je Medium: Tabelle 2
Tabelle 2 definiert die Mindestmenge, die je Medium und je beprobtem Behältnis zu verwenden ist. Für Flüssigkeiten:
- Volumen < 1 mL: der gesamte Inhalt des Behältnisses;
- 1–40 mL: die Hälfte des Inhalts, jedoch nicht weniger als 1 mL;
- > 40 mL und ≤ 100 mL: 20 mL;
- > 100 mL: 10 % des Inhalts, jedoch nicht weniger als 20 mL;
- antibiotische Flüssigkeiten: 1 mL.
Für Feststoffe:
- < 50 mg: der gesamte Inhalt des Behältnisses;
- 50 mg bis unter 300 mg: die Hälfte des Inhalts, jedoch nicht weniger als 50 mg;
- 300 mg bis 5 g: 150 mg;
- > 5 g: 500 mg.
Für unlösliche Zubereitungen, Cremes und Salben beträgt die Referenzmenge mindestens 200 mg; bei Medizinprodukten wird das gesamte Produkt verwendet, zerteilt oder zerlegt.
USP <71> und Ph. Eur. 2.6.1: Harmonisierung und Austauschbarkeit
Die Tabellen der USP <71> stimmen mit denen des Kapitels 2.6.1 des Europäischen Arzneibuchs und des entsprechenden Kapitels des Japanischen Arzneibuchs überein: Der Text wurde von der Pharmacopeial Discussion Group harmonisiert. Die ICH-Leitlinie Q4B Annex 8, von den Behörden der ICH-Regionen übernommen (für die EU über die EMA, für die USA über die FDA), erkennt die regulatorische Austauschbarkeit der drei Kapitel an — mit einigen lokalen Präzisierungen, die im Annex selbst aufgeführt sind.
Zwei praktische Hinweise. Erstens: Die Austauschbarkeit entbindet nicht davon, im Zulassungsdossier anzugeben, welches Arzneibuch gilt, und die von den Behörden benannten Restdivergenzen zu beherrschen. Zweitens: Für aseptisch hergestellte sterile Produkte verlangt Annex 1 des EU-GMP-Leitfadens, dass die Proben für den Sterilitätstest repräsentativ für die gesamte Charge sind und insbesondere die Einheiten mit dem höchsten Risiko einschließen: die zu Beginn und am Ende der aseptischen Abfüllung sowie nach signifikanten Eingriffen an der Linie abgefüllten Einheiten. Das kompendiale Minimum der Tabelle 3 muss daher mit einem risikobasierten Auswahlkriterium kombiniert werden.
Typische Audit-Feststellungen zur Stichprobengröße
- Beprobung unter dem Minimum bei teuren Produkten: Der wirtschaftliche Wert der Einheiten (Biologika, ATMP, kleine Chargen) rechtfertigt keine Abweichung von Tabelle 3; Reduzierungen gelten nur dort, wo das Kapitel selbst sie vorsieht (z. B. sehr kleine Chargen von Bulk-Feststoffen).
- Verwechslung der beiden Tabellen: Tabelle 3 zählt Behältnisse pro Charge, Tabelle 2 Mengen pro Behältnis und Medium; der Probenahmeplan muss beide dokumentieren.
- Vergessene Verdopplung der Einheiten, wenn der Inhalt eines Behältnisses nicht für beide Medien ausreicht.
- Nicht repräsentative Auswahl: Einheiten, die alle vom selben Punkt der Abfüllung stammen, ohne Beginn, Ende und Eingriffe abzudecken — im Widerspruch zu Annex 1.
- Nicht abgestimmte SOPs zwischen Standort und Auftragslabor: Das Auftragslabor wendet ein Arzneibuch an, das Dossier deklariert ein anderes.
GuideGxP-Empfehlung
Der solideste Weg zu einer verteidigungsfähigen Stichprobengröße ist, jede Ad-hoc-Berechnung am Tag der Probenahme zu vermeiden: Übernehmen Sie die Tabellen 2 und 3 in die SOP des Sterilitätstests, erstellen Sie eine Matrix für die wiederkehrenden Formate und Chargengrößen Ihres Standorts (mit bereits berechneter und von QA geprüfter Einheitenzahl) und integrieren Sie das Repräsentativitätskriterium des Annex 1 mit einer Karte der Entnahmepunkte in den Probenahmeplan. Im Audit ist die Konsistenz zwischen SOP, Chargendokumentation und Zulassungsdossier das Erste, was der Inspektor prüft.
Wenn Sie in mehreren Märkten arbeiten und Divergenzen zwischen den Pharmakopöen auch über den Sterilitätstest hinaus managen müssen, liefert die operative Anleitung Pharmakopöen im Vergleich (GMP): USP – Ph. Eur. – JP – BP-Divergenzen im GxP-Audit beherrschen Entscheidungskriterien und sofort einsetzbare Werkzeuge, um Ihre kompendialen Entscheidungen in der Inspektion zu verteidigen.
