L'échantillonnage de l'essai de stérilité USP <71> est l'un des points les plus contrôlés lors des audits et des inspections réglementaires : combien d'unités prélever sur chaque lot et quelle quantité de produit transférer dans chaque milieu de culture ne sont pas des choix du laboratoire, mais des exigences compendiales définies par deux tableaux du chapitre. Un plan d'échantillonnage inférieur au minimum rend l'essai non conforme, avec des conséquences directes sur la libération du lot. Dans ce guide, nous voyons comment appliquer correctement les règles de l'USP <71>, comment elles s'articulent avec la Ph. Eur. 2.6.1 et quelles erreurs éviter pour rester prêt pour l'audit.
Échantillonnage USP <71> : ce que le chapitre exige
Le chapitre USP <71> Sterility Tests est un texte harmonisé entre les trois pharmacopées du Pharmacopeial Discussion Group (USP, Ph. Eur. et JP). L'essai utilise deux milieux de culture : le milieu liquide au thioglycolate (FTM), incubé à 30–35 °C et destiné principalement aux bactéries anaérobies ainsi qu'aux aérobies, et le milieu à l'hydrolysat de caséine et de soja (SCDM/TSB), incubé à 20–25 °C pour les champignons et les bactéries aérobies. L'incubation dure au moins 14 jours, avec observation périodique des cultures.
L'échantillonnage est régi par deux tableaux distincts, qui répondent à deux questions différentes :
- Tableau 2 — quelle quantité de produit prélever dans chaque récipient pour chaque milieu, selon le volume ou le poids de remplissage ;
- Tableau 3 — combien d'unités tester par lot, selon la taille du lot et le type de produit.
Les règles s'appliquent aussi bien à la filtration sur membrane — à privilégier chaque fois que la nature du produit le permet — qu'à l'inoculation directe.
Combien d'unités tester par lot : le Tableau 3
Le Tableau 3 fixe le nombre minimal d'articles à tester en fonction du nombre d'articles du lot. Les seuils principaux pour les catégories les plus courantes sont résumés ci-dessous.
| Type de produit | Taille du lot | Nombre minimal d'unités à tester |
|---|---|---|
| Préparations parentérales | ≤ 100 récipients | 10 % ou 4 récipients, la valeur la plus élevée |
| 101–500 récipients | 10 récipients | |
| > 500 récipients | 2 % ou 20 récipients, la valeur la plus faible | |
| Parentéraux de grand volume | — | 2 % ou 10 récipients, la valeur la plus faible |
| Ophtalmiques et autres non injectables | ≤ 200 récipients | 5 % ou 2 récipients, la valeur la plus élevée |
| > 200 récipients | 10 récipients | |
| Produits solides en vrac | ≤ 4 récipients | Chaque récipient |
| 5–50 récipients | 20 % ou 4 récipients, la valeur la plus élevée | |
| > 50 récipients | 2 % ou 10 récipients, la valeur la plus élevée |
Un point souvent mal compris : si le contenu de chaque unité est suffisant pour les deux milieux (selon le Tableau 2), il peut être divisé en portions égales ajoutées à chaque milieu. Si le contenu ne suffit pas pour les deux, il faut utiliser le double du nombre d'unités indiqué dans le tableau.
Des sujets comme celui-ci — des exigences compendiales traduites en pratique opérationnelle — sont le cœur de The Pragmatic GMP, la newsletter hebdomadaire gratuite de GuideGxP : chaque semaine, une analyse BPF concrète et sans détour dans votre boîte mail. Inscrivez-vous ici.
Quelle quantité de produit par milieu : le Tableau 2
Le Tableau 2 définit la quantité minimale à utiliser pour chaque milieu, pour chaque récipient échantillonné. Pour les liquides :
- volume < 1 mL : la totalité du contenu du récipient ;
- 1–40 mL : la moitié du contenu, mais pas moins de 1 mL ;
- > 40 mL et ≤ 100 mL : 20 mL ;
- > 100 mL : 10 % du contenu, mais pas moins de 20 mL ;
- liquides antibiotiques : 1 mL.
Pour les solides :
- < 50 mg : la totalité du contenu du récipient ;
- de 50 mg à moins de 300 mg : la moitié du contenu, mais pas moins de 50 mg ;
- de 300 mg à 5 g : 150 mg ;
- > 5 g : 500 mg.
Pour les préparations insolubles, crèmes et pommades, la quantité de référence est d'au moins 200 mg, tandis que pour les dispositifs médicaux on utilise le dispositif entier, découpé en morceaux ou démonté.
USP <71> et Ph. Eur. 2.6.1 : harmonisation et interchangeabilité
Les tableaux de l'USP <71> coïncident avec ceux du chapitre 2.6.1 de la Pharmacopée européenne et du chapitre correspondant de la Pharmacopée japonaise : le texte a été harmonisé par le Pharmacopeial Discussion Group. La ligne directrice ICH Q4B Annexe 8, adoptée par les autorités des régions ICH (via l'EMA pour l'UE et la FDA pour les États-Unis), reconnaît l'interchangeabilité des trois chapitres à des fins réglementaires, avec quelques précisions locales indiquées dans l'annexe elle-même.
Deux points de vigilance pratiques. Premièrement : l'interchangeabilité ne dispense pas de déclarer dans le dossier quelle pharmacopée s'applique ni de maîtriser les divergences résiduelles signalées par les autorités. Deuxièmement : pour les produits stériles fabriqués de manière aseptique, l'Annexe 1 des BPF de l'UE exige que les échantillons pour l'essai de stérilité soient représentatifs de l'ensemble du lot et incluent en particulier les unités les plus à risque : celles remplies au début et à la fin du remplissage aseptique et après des interventions significatives sur la ligne. Le minimum compendial du Tableau 3 doit donc être combiné avec un critère de sélection des unités fondé sur le risque.
Erreurs typiques relevées en audit
- Échantillonner en dessous du minimum pour les produits coûteux : la valeur économique des unités (produits biologiques, ATMP, petits lots) ne justifie pas de déroger au Tableau 3 ; les réductions ne s'appliquent que là où le chapitre lui-même les prévoit (par ex. très petits lots de solides en vrac).
- Confondre les deux tableaux : le Tableau 3 compte les récipients par lot, le Tableau 2 les quantités par récipient et par milieu ; le plan d'échantillonnage doit documenter les deux.
- Oublier de doubler les unités lorsque le contenu d'un récipient ne suffit pas pour les deux milieux.
- Sélection non représentative : unités toutes prélevées au même point du remplissage, sans couvrir le début, la fin et les interventions, en contradiction avec l'Annexe 1.
- Procédures désalignées entre le site et le laboratoire sous-traitant : le laboratoire applique une pharmacopée alors que le dossier en déclare une autre.
Recommandation GuideGxP
La façon la plus solide de rendre l'échantillonnage défendable est de supprimer tout calcul improvisé le jour du prélèvement : reproduisez les Tableaux 2 et 3 dans la procédure de l'essai de stérilité, préparez une matrice pour les formats et tailles de lots récurrents de votre site (avec le nombre d'unités déjà calculé et vérifié par l'AQ) et intégrez au plan d'échantillonnage le critère de représentativité de l'Annexe 1, avec la carte des points de prélèvement. En audit, la cohérence entre procédure, dossier de lot et dossier réglementaire est la première chose que vérifie l'inspecteur.
Si vous travaillez sur plusieurs marchés et devez gérer les divergences entre pharmacopées au-delà de l'essai de stérilité, le guide opérationnel Pharmacopées comparées en GMP : gestion opérationnelle des divergences USP – Ph. Eur. – JP – BP en audit GxP fournit des critères de décision et des outils prêts à l'emploi pour défendre vos choix compendiaux en inspection.
