USP <61> y <62> son los dos capítulos de la Farmacopea de los Estados Unidos que regulan el examen microbiológico de los productos no estériles: el primero define las pruebas de recuento (TAMC y TYMC), el segundo la detección de microorganismos especificados. En el laboratorio suelen citarse juntos, pero responden a dos preguntas distintas: "¿cuántos microorganismos hay?" y "¿hay microorganismos inaceptables para esta vía de administración?". Confundirlos — o aplicar solo uno cuando la monografía exige ambos — es una de las causas más frecuentes de especificaciones incompletas y de hallazgos en auditoría. En esta guía comparamos los dos capítulos, con los requisitos operativos de cada uno y los errores que conviene evitar.
USP <61> y <62>: dos capítulos, un único sistema
Los dos capítulos están concebidos para usarse en pareja y están armonizados a través del Pharmacopeial Discussion Group (PDG) con la Farmacopea Europea (Ph. Eur. 2.6.12 y 2.6.13) y con la Farmacopea Japonesa: un método conforme a USP <61>/<62> es, por tanto, superponible a los capítulos europeos equivalentes, una ventaja concreta para las plantas que liberan producto en varios mercados bajo buenas prácticas de manufactura. El tercer elemento del sistema es USP <1111>, el capítulo informativo que fija los criterios de aceptación por forma farmacéutica: <61> y <62> dicen cómo se ejecuta la prueba, <1111> dice qué resultado es aceptable.
| Aspecto | USP <61> | USP <62> |
|---|---|---|
| Pregunta a la que responde | Cuántos microorganismos viables contiene el producto (recuento cuantitativo) | Si hay microorganismos especificados "objetables" (resultado cualitativo: presencia/ausencia) |
| Resultado de la prueba | TAMC y TYMC en UFC/g o UFC/mL | Ausencia (o presencia) del microorganismo diana en la cantidad de muestra definida |
| Métodos previstos | Filtración por membrana, siembra en profundidad, siembra en superficie, NMP | Enriquecimiento en caldo seguido de aislamiento en medios selectivos |
| Medios principales | Agar digerido de caseína y soja (TAMC), agar Sabouraud dextrosa (TYMC) | Medios selectivos dedicados: MacConkey, XLD, Cetrimida, Manitol Salado, VRBG, Columbia |
| Incubación | TAMC: 30–35 °C durante 3–5 días; TYMC: 20–25 °C durante 5–7 días | Variable según la diana (p. ej., enriquecimiento de E. coli en caldo MacConkey a 42–44 °C) |
| Uso típico | Especificaciones de liberación y estabilidad, control de materias primas | Conformidad con los requisitos por vía de administración según <1111> |
USP <61>: recuento microbiano (TAMC y TYMC)
El capítulo <61> mide la carga microbiana total mediante dos recuentos distintos: el Total Aerobic Microbial Count (TAMC) en agar digerido de caseína y soja, incubado a 30–35 °C durante 3–5 días, y el Total Combined Yeasts and Molds Count (TYMC) en agar Sabouraud dextrosa, incubado a 20–25 °C durante 5–7 días. El laboratorio elige entre filtración por membrana, siembra en profundidad, siembra en superficie o número más probable (NMP) en función de la naturaleza de la muestra y del límite a verificar: la filtración por membrana es preferible cuando el límite es bajo o el producto tiene actividad antimicrobiana eliminable con enjuagues, mientras que el NMP se reserva para los casos en que los demás métodos no son aplicables.
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USP <62>: la detección de microorganismos especificados
El capítulo <62> no cuenta: busca. La lógica es enriquecimiento en caldo no selectivo o selectivo, seguido de subcultivo en medio selectivo y confirmación de la identidad. Las dianas previstas por el capítulo son:
- Bacterias gramnegativas tolerantes a la bilis — enriquecimiento en Enterobacteria Enrichment Broth Mossel, aislamiento en agar Violet Red Bile Glucose;
- Escherichia coli — enriquecimiento en caldo MacConkey a 42–44 °C, aislamiento en agar MacConkey;
- Salmonella — sobre al menos 10 g de producto, con caldo Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment y agar Xylose Lysine Deoxycholate;
- Pseudomonas aeruginosa — aislamiento en agar Cetrimida;
- Staphylococcus aureus — aislamiento en agar Manitol Salado;
- Clostridios — Reinforced Medium for Clostridia y agar Columbia en anaerobiosis;
- Candida albicans — caldo Sabouraud dextrosa y agar Sabouraud dextrosa.
Qué dianas analizar no lo decide el laboratorio: lo deciden la monografía del producto y los requisitos por vía de administración. Un producto oral acuoso exige típicamente la ausencia de E. coli; un tópico, la ausencia de S. aureus y P. aeruginosa; un rectal, por regla general, ningún microorganismo especificado.
Aptitud del método: donde se falla
Ambos capítulos exigen demostrar la aptitud del método en presencia del producto, y es ahí donde se concentran los hallazgos. Los requisitos clave son tres. Primero: el inóculo de las cepas de referencia no debe superar las 100 UFC, con cepas inoculadas individualmente y nunca en mezcla. Las cepas indicadas por el capítulo armonizado incluyen S. aureus ATCC 6538, P. aeruginosa ATCC 9027, B. subtilis ATCC 6633, C. albicans ATCC 10231 y A. brasiliensis ATCC 16404 (o equivalentes de otras colecciones reconocidas como NCIMB, CIP, NBRC). Segundo: para <61>, la recuperación en presencia del producto no debe diferir en un factor superior a 2 respecto al control sin producto; si el producto inhibe, deben aplicarse neutralizantes, diluciones o filtración con enjuagues, y la elección debe documentarse en el PNT correspondiente. Tercero: un control negativo debe acompañar cada ejecución de la prueba para demostrar la ausencia de contaminación del procedimiento. Una aptitud realizada una sola vez y nunca reevaluada tras cambios de formulación es un hallazgo clásico: el razonamiento de su validez en el tiempo debe estar escrito, no presupuesto.
Criterios de aceptación: el papel de USP <1111>
Los resultados de <61> y <62> se interpretan con los criterios de USP <1111>, armonizado con Ph. Eur. 5.1.4. Para las formas orales acuosas la referencia típica es TAMC 102 UFC/g o mL y TYMC 101, con ausencia de E. coli en 1 g o mL; para las orales no acuosas, TAMC 103 y TYMC 102; para las vías cutánea, nasal y auricular, TAMC 102 y TYMC 101 con ausencia de S. aureus y P. aeruginosa; para la vía inhalatoria se añade la ausencia de gramnegativos tolerantes a la bilis. Atención a la interpretación de los límites, a menudo errónea en los PNT: un criterio de 102 UFC corresponde a un máximo aceptable de 200 UFC, no de 100, porque el capítulo admite la variabilidad intrínseca del método de recuento. Y cumplir los límites de <1111> no agota el tema: la evaluación de los microorganismos "objetables" para el producto, el proceso y el paciente sigue siendo responsabilidad del fabricante, como la FDA recuerda sistemáticamente en las inspecciones de no estériles.
Recomendación GuideGxP
En las especificaciones y en los PNT, trata <61> y <62> como un sistema único: especificación de producto que cite TAMC, TYMC y los microorganismos especificados con la cantidad de muestra; aptitud documentada para cada matriz, con razonamiento de reevaluación en cada cambio de formulación o proveedor; interpretación de los límites escrita negro sobre blanco (102 = máximo 200 UFC) para evitar OOS declarados por exceso de celo; y un razonamiento documentado sobre los microorganismos objetables más allá de las dianas de <62>. En auditoría, la pregunta no será "¿ejecutas la prueba?", sino "¿por qué tu método es apto para este producto?".
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