USP <61> und <62> sind die beiden Kapitel des US-Arzneibuchs, die die mikrobiologische Prüfung nicht steriler Produkte regeln: Das erste definiert die Prüfungen zur Keimzahlbestimmung (TAMC und TYMC), das zweite die Prüfung auf spezifizierte Mikroorganismen. Im Labor werden sie oft in einem Atemzug genannt, beantworten aber zwei unterschiedliche Fragen: „Wie viele Mikroorganismen sind vorhanden?" und „Sind Mikroorganismen vorhanden, die für diesen Verabreichungsweg inakzeptabel sind?". Sie zu verwechseln — oder nur eines anzuwenden, wenn die Monographie beide fordert — ist eine der häufigsten Ursachen für unvollständige Spezifikationen und Audit-Beanstandungen. In diesem Leitfaden vergleichen wir die beiden Kapitel, mit den operativen Anforderungen und den Fehlern, die es zu vermeiden gilt.
USP <61> und <62>: zwei Kapitel, ein System
Die beiden Kapitel sind als Paar konzipiert und über die Pharmacopeial Discussion Group (PDG) mit dem Europäischen Arzneibuch (Ph. Eur. 2.6.12 und 2.6.13) und dem Japanischen Arzneibuch harmonisiert: Eine Methode, die USP <61>/<62> entspricht, ist damit deckungsgleich mit den äquivalenten europäischen Kapiteln — ein konkreter Vorteil für Standorte, die für mehrere Märkte freigeben. Das dritte Element des Systems ist USP <1111>, das informative Kapitel, das die Akzeptanzkriterien je Darreichungsform festlegt: <61> und <62> sagen, wie die Prüfung durchzuführen ist, <1111> sagt, welches Ergebnis akzeptabel ist.
| Aspekt | USP <61> | USP <62> |
|---|---|---|
| Beantwortete Frage | Wie viele vermehrungsfähige Mikroorganismen enthält das Produkt (quantitative Zählung) | Sind spezifizierte, „objectionable" Mikroorganismen vorhanden (qualitatives Ergebnis: Nachweis/kein Nachweis) |
| Prüfergebnis | TAMC und TYMC in KBE/g oder KBE/mL | Abwesenheit (oder Nachweis) des Zielorganismus in der definierten Probenmenge |
| Vorgesehene Methoden | Membranfiltration, Plattengussverfahren, Spatelverfahren, MPN | Anreicherung in Bouillon, dann Isolierung auf Selektivmedien |
| Wichtigste Nährmedien | Casein-Sojamehlpepton-Agar (TAMC), Sabouraud-Dextrose-Agar (TYMC) | Dedizierte Selektivmedien: MacConkey, XLD, Cetrimid, Mannit-Kochsalz, VRBG, Columbia |
| Bebrütung | TAMC: 30–35 °C für 3–5 Tage; TYMC: 20–25 °C für 5–7 Tage | Zielabhängig (z. B. E.-coli-Anreicherung in MacConkey-Bouillon bei 42–44 °C) |
| Typische Anwendung | Freigabe- und Stabilitätsspezifikationen, Rohstoffkontrolle | Konformität mit den Anforderungen je Verabreichungsweg gemäß <1111> |
USP <61>: Keimzahlbestimmung (TAMC und TYMC)
Kapitel <61> misst die mikrobielle Gesamtbelastung über zwei getrennte Zählungen: den Total Aerobic Microbial Count (TAMC) auf Casein-Sojamehlpepton-Agar, bebrütet bei 30–35 °C für 3–5 Tage, und den Total Combined Yeasts and Molds Count (TYMC) auf Sabouraud-Dextrose-Agar, bebrütet bei 20–25 °C für 5–7 Tage. Das Labor wählt zwischen Membranfiltration, Plattenguss-, Spatelverfahren oder Most Probable Number (MPN) je nach Beschaffenheit der Probe und dem zu prüfenden Grenzwert: Die Membranfiltration ist vorzuziehen, wenn der Grenzwert niedrig ist oder das Produkt eine durch Spülen entfernbare antimikrobielle Aktivität besitzt, während das MPN-Verfahren den Fällen vorbehalten ist, in denen die anderen Methoden nicht anwendbar sind.
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USP <62>: die Prüfung auf spezifizierte Mikroorganismen
Kapitel <62> zählt nicht: Es sucht. Die Logik ist eine Anreicherung in nicht selektiver oder selektiver Bouillon, gefolgt von einer Subkultur auf Selektivmedium und der Bestätigung der Identität. Die im Kapitel vorgesehenen Zielorganismen sind:
- Gallensalztolerante gramnegative Bakterien — Anreicherung in Enterobacteria Enrichment Broth Mossel, Isolierung auf Violet-Red-Bile-Glucose-Agar;
- Escherichia coli — Anreicherung in MacConkey-Bouillon bei 42–44 °C, Isolierung auf MacConkey-Agar;
- Salmonellen — an mindestens 10 g Produkt, mit Rappaport-Vassiliadis-Salmonella-Anreicherungsbouillon und Xylose-Lysin-Desoxycholat-Agar;
- Pseudomonas aeruginosa — Isolierung auf Cetrimid-Agar;
- Staphylococcus aureus — Isolierung auf Mannit-Kochsalz-Agar;
- Clostridien — Reinforced Medium for Clostridia und Columbia-Agar unter anaeroben Bedingungen;
- Candida albicans — Sabouraud-Dextrose-Bouillon und Sabouraud-Dextrose-Agar.
Welche dieser Zielorganismen zu prüfen sind, entscheidet nicht das Labor: Das bestimmen die Produktmonographie und die Anforderungen je Verabreichungsweg. Ein wässriges orales Produkt erfordert typischerweise die Abwesenheit von E. coli; ein Topikum die Abwesenheit von S. aureus und P. aeruginosa; eine rektale Zubereitung in der Regel keine spezifizierten Mikroorganismen.
Methodeneignung: die häufigste Schwachstelle
Beide Kapitel verlangen den Nachweis der Methodeneignung in Gegenwart des Produkts — und genau hier häufen sich die Beanstandungen. Drei Anforderungen sind entscheidend. Erstens: Das Inokulum der Referenzstämme darf 100 KBE nicht überschreiten, wobei die Stämme einzeln und niemals als Mischung beimpft werden. Die im harmonisierten Kapitel genannten Stämme umfassen S. aureus ATCC 6538, P. aeruginosa ATCC 9027, B. subtilis ATCC 6633, C. albicans ATCC 10231 und A. brasiliensis ATCC 16404 (oder Äquivalente anderer anerkannter Sammlungen wie NCIMB, CIP, NBRC). Zweitens: Für <61> darf die Wiederfindung in Gegenwart des Produkts nicht um mehr als den Faktor 2 vom Kontrollansatz ohne Produkt abweichen; wirkt das Produkt hemmend, sind Neutralisationsmittel, Verdünnungen oder Filtration mit Spülschritten anzuwenden — und die Wahl ist in der SOP-Vorlage zu dokumentieren. Drittens: Eine Negativkontrolle muss jede Durchführung der Prüfung begleiten, um die Abwesenheit prozeduraler Kontamination zu belegen. Eine einmal durchgeführte und nach Formulierungsänderungen nie neu bewertete Eignungsprüfung ist eine klassische Beanstandung: Die Begründung ihrer fortdauernden Gültigkeit muss schriftlich vorliegen, nicht stillschweigend angenommen werden.
Akzeptanzkriterien: die Rolle von USP <1111>
Die Ergebnisse von <61> und <62> werden anhand der Kriterien von USP <1111> interpretiert, harmonisiert mit Ph. Eur. 5.1.4. Für wässrige orale Darreichungsformen gilt typischerweise TAMC 102 KBE/g oder mL und TYMC 101, mit Abwesenheit von E. coli in 1 g oder mL; für nicht wässrige orale Formen TAMC 103 und TYMC 102; für die kutane, nasale und aurikuläre Anwendung TAMC 102 und TYMC 101 mit Abwesenheit von S. aureus und P. aeruginosa; für die Inhalation kommt die Abwesenheit gallensalztoleranter Gramnegativer hinzu. Vorsicht bei der Interpretation der Grenzwerte, die in SOPs oft falsch ist: Ein Kriterium von 102 KBE entspricht einem maximal akzeptablen Wert von 200 KBE, nicht von 100, weil das Kapitel die inhärente Variabilität der Zählmethode berücksichtigt. Und die Einhaltung der Grenzwerte von <1111> erledigt das Thema nicht: Die Bewertung „objectionable" Mikroorganismen für Produkt, Prozess und Patient bleibt in der Verantwortung des Herstellers, woran die FDA in Inspektionen nicht steriler Betriebe systematisch erinnert.
GuideGxP-Empfehlung
Behandle <61> und <62> in Spezifikationen und SOPs als ein einziges System: eine Produktspezifikation, die TAMC, TYMC und die spezifizierten Mikroorganismen samt Probenmenge nennt; eine dokumentierte Methodeneignung je Matrix, mit Begründung der Neubewertung bei jedem Formulierungs- oder Lieferantenwechsel; eine schwarz auf weiß festgehaltene Interpretation der Grenzwerte (102 = maximal 200 KBE), um aus Übereifer deklarierte OOS zu vermeiden; und eine dokumentierte Begründung zu „objectionable organisms" über die Zielkeime von <62> hinaus. Im Audit lautet die Frage nicht „Führen Sie die Prüfung durch?", sondern „Warum ist Ihre Methode für dieses Produkt geeignet?".
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