USP capítulo <621> Cromatografía es el capítulo general de la Farmacopea de los Estados Unidos que todo laboratorio de control de calidad farmacéutico aplica, muchas veces sin haberlo leído completo. Define los términos cromatográficos, los requisitos de aptitud del sistema (system suitability) y — sobre todo — los ajustes que puedes aplicar a un método compendial sin revalidarlo. Desde el 1 de diciembre de 2022 el capítulo es oficial en la versión armonizada con la Farmacopea Europea (cap. 2.2.46) a través del Pharmacopeial Discussion Group, y eso cambió reglas que muchos laboratorios daban por sentadas: resolución calculada a media altura, nueva ventana para el factor de simetría y ajustes por fin permitidos también en los métodos en gradiente. En esta guía vemos qué establece el capítulo, qué cambió y dónde se equivocan con más frecuencia los laboratorios.
USP <621>: qué cubre el capítulo y por qué afecta a cada análisis
Cuando una monografía USP prescribe un análisis por HPLC, GC o TLC, las reglas del juego no están en la monografía: están en el capítulo <621>. El capítulo se aplica a todos los procedimientos cromatográficos compendiales y se articula en tres bloques principales:
- Definiciones: tiempo de retención, número de platos teóricos, factor de simetría, resolución, relación señal/ruido, dwell volume. La versión armonizada trasladó aquí la relación señal/ruido e introdujo magnitudes como la altura de plato y el número de platos calculado a media altura.
- Aptitud del sistema: las pruebas que demuestran, en cada secuencia, que el sistema cromatográfico es adecuado para el análisis a realizar.
- Ajustes permitidos: los límites dentro de los cuales las condiciones operativas pueden adaptarse sin que el cambio se convierta en una modificación del método, con secciones específicas para LC isocrática, LC en gradiente, GC y TLC.
El punto regulatorio esencial: mientras permanezcas dentro de los ajustes permitidos y la aptitud del sistema pase, no hace falta revalidar. Si sales de esos límites, has modificado el método, y el cambio debe gestionarse con validación y control de cambios. Es la pregunta que un inspector hace casi siempre ante un método compendial «adaptado»: ¿quién verificó que la adaptación estaba dentro de los límites del capítulo?
La armonización con Ph. Eur. 2.2.46: qué cambió desde 2022
El texto armonizado, aprobado por el Pharmacopeial Discussion Group con la Farmacopea Europea como farmacopea coordinadora, se incorporó a USP–NF 2022 Issue 3 y es oficial desde el 1 de diciembre de 2022. Las novedades más relevantes para el laboratorio:
- Resolución a media altura: se eliminó el cálculo basado en la anchura en la base; la resolución y el número de platos se calculan sobre la anchura del pico a media altura.
- Relación señal/ruido: se revisó la definición y la ventana de ruido pasó de 5 a 20 anchuras de pico.
- Factor de simetría: el requisito general de aptitud del sistema establece un intervalo de 0,8–1,8, salvo indicación distinta de la monografía. Atención: para este requisito y para la sensibilidad del sistema, la USP pospuso la aplicación mediante Revision Bulletin para dar tiempo a los laboratorios a evaluar el impacto en sus procedimientos.
- Gradiente: por primera vez se permiten ajustes también en los métodos en gradiente, antes totalmente excluidos.
- Umbrales de reporte: el concepto de «disregard limit» fue sustituido por los reporting thresholds.
Para quien trabaja multi-región la consecuencia práctica es positiva: USP <621> y Ph. Eur. 2.2.46 ahora dicen (casi) lo mismo, y las porciones de texto nacional no armonizado están marcadas explícitamente en el capítulo USP.
Las farmacopeas cambian más rápido de lo que los PNT pueden seguir — y la implementación de un capítulo general revisado es exactamente el tipo de plazo que se escapa. Con The Pragmatic GMP, el boletín semanal gratuito de GuideGxP, recibes las novedades regulatorias y compendiales ya traducidas en acciones operativas para tu laboratorio: suscríbete y llega preparado a la próxima revisión.
Ajustes permitidos: qué puedes cambiar sin revalidar
Los ajustes solo valen si se cumplen algunas condiciones de partida: deben servir para cumplir la aptitud del sistema, no para compensar una columna degradada o un mal funcionamiento del sistema; el cromatograma resultante debe superar todos los requisitos de aptitud del procedimiento oficial; y los efectos de varios ajustes combinados deben evaluarse con prudencia, porque se acumulan. Estos son los límites principales para LC:
| Parámetro | Ajuste permitido | Nota operativa |
|---|---|---|
| pH de la fase móvil | ±0,2 unidades | Medir y registrar: es el parámetro que más a menudo desplaza selectividad y simetría |
| Concentración de sal del tampón | ±10% | Siempre que se respete la variación de pH permitida |
| Componente menor de la fase móvil (≤50%) | ±30% relativo, máx. ±10% absoluto | En mezclas ternarias solo se ajusta un componente menor |
| Longitud de columna y partícula | Relación L/dp de −25% a +50% | Permite pasar a columnas más cortas o partículas más pequeñas; para partículas superficialmente porosas se usa el criterio equivalente de eficiencia |
| Flujo | Recálculo con la fórmula del capítulo + un ±50% adicional | El flujo se adapta al diámetro y la partícula de la nueva columna |
| Volumen de inyección | Recálculo proporcional a las dimensiones de la columna | Con la fórmula del capítulo, no a discreción del analista |
| Temperatura de la columna | ±10 °C | Cuando la monografía especifica una temperatura |
| Fase estacionaria | Sin cambio de tipo (p. ej. de L1 a L7) | Cambiar la química de la fase es una modificación del método: requiere validación |
| Longitud de onda del detector | Ningún ajuste | Cualquier variación es una modificación del método |
En los métodos en gradiente la lógica es mantener constante la relación entre el volumen del gradiente y el volumen de la columna: cada segmento del gradiente se recalcula en función del flujo y de las dimensiones de la nueva columna, con las fórmulas del capítulo. Es lo que hoy hace defendible en auditoría la modernización de un método compendial hacia columnas más cortas y eficientes — siempre que se documenten los cálculos y el resultado de la aptitud del sistema.
Los hallazgos más comunes en auditoría
- Ajustes usados para «hacer pasar» la aptitud del sistema con una columna agotada: el capítulo lo prohíbe expresamente, y la tendencia de los datos lo evidencia.
- Condiciones operativas distintas de las de la monografía sin ninguna evaluación documentada frente a los límites del capítulo <621>.
- Cálculos de resolución y platos teóricos todavía configurados sobre la anchura en la base en el CDS, aunque el texto armonizado exige la media altura.
- Cambio de fase estacionaria o de longitud de onda tratado como «ajuste», cuando es en realidad una modificación que exige validación.
- Varios ajustes combinados sin evaluar su efecto acumulado ni una verificación adicional del método.
Recomendación GuideGxP
No trates el capítulo USP <621> como una referencia que citar en los PNT y nada más: conviértelo en una herramienta operativa. Prepara un formulario de evaluación de ajustes — parámetro, valor de la monografía, valor adoptado, límite del capítulo, resultado de la aptitud del sistema — y hazlo obligatorio cada vez que un método compendial no se ejecute exactamente como está escrito. Verifica además cómo calcula tu CDS la resolución, los platos y la relación señal/ruido: tras la armonización, las configuraciones por defecto heredadas del pasado son uno de los hallazgos más fáciles de prevenir.
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